【生化实验|生化实验 小鼠肝组织rna提取及rt-pcr实验课件】1、小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR,一、试剂及材料,1、小鼠肝脏 2、DEPC处理过的EP管、PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水,二、实验原理,TRIZOL：异硫氰酸胍 + 苯酚,裂解细胞 ， RNA与蛋白质分离 ， 将RNA释放到溶液中,促使RNA进入水相 ， 离心后可形成水相层和有机层,RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开 。
水相层（无色）主要为RNA ， 有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质,三、实验步骤,RNA提取 1、新鲜肝组织置EP管中 ， 加200l Trizol充分研磨后 ， 补加800l Trizol ， 枪头吹匀 。
2、加入200l 氯仿 ， 剧烈震荡15秒 ， 4 12000g离心 。

2、15min 。
3、将上层水相移至洁净EP管中 ， 加入500l异丙醇颠倒混匀 。
4、4 12000g离心10min 。
5、弃水相 ， EP管开盖干燥 ， 溶于50l DEPC水中,RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR,RT-PCR操作步骤,5x Prime Script Buffer 2 l Prime Script RT Enzyme Mix 0.5 l Oligo dT primer (50 m) 0.5 l Random 6 mers (100 m) 1 l 提取的RNA 0.5 l RNase Free 水 5.5 l 37 15min 85 5 sec,10 l,生化实验 小鼠肝组织rna提取及rt-pcr实验,7,PCR 10 x PCR Buffer 5 l dNTP 4 l 模板DNA 2 l 引物1 2 l 引物2 2 l Tag 酶0.5 l H2O 34.5 l,50 l,94 5 min 94 30 sec 54 30 sec 72 30 sec 72 7 min,25 cycle,20 ul 样本 4 ul loading buffer 1 ul DNA 染料 1%琼脂糖凝胶电泳观察结果 。

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标题：生化实验|生化实验 小鼠肝组织rna提取及rt-pcr实验课件